flag标签作用
可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目标蛋白。
FLAG-标签指一段由8个氨基酸残基组成的。Flag标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于各种细胞类型,包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等,相应的Flag标签抗体也被广泛应用。
由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。Flag标签可以通过加入肠激酶处理去除,肠激酶专一识别该肽序列C末端的5个氨基酸残基。
扩展资料
在蛋白表达和定位研究中, 可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来,可以连接在目的蛋白的C端或N端,然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞抑或受精卵中。
后续检测主要通过FLAG-tag这段肽链形成的免疫决定簇与其单克隆抗体的特异性结合来实现,检测手段有免疫荧光(immunofluorescence),免疫印记(Western Blotting)等。
参考资料来源:百度百科-标签抗体
参考资料来源:百度百科-FLAG-tag
可以通过基因工程技术手段将所要研究的目的基因和FLAG-tag基因序列连接起来,可以连接在目的蛋白的C端或N端, 然后将整合后的基因转入细胞中或胚胎干细胞抑或受精卵中。
后续检测主要通过FLAG-tag这段肽链形成的免疫决定簇与其单克隆抗体的特异性结合来实现。 检测手段有免疫荧光(immunofluorescence), 免疫印记(Western Blotting)等。
随着生物技术的发展,科研人员可以通过DNA重组技术,构建包含目的基因以及表位标记的融合蛋白,进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化,以达到研究的需求。
扩展资料
FLAG-tag类别:
1、Flag抗体-抗Flag标签抗体
融合标签,如Flag、GST等标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。
2、GST抗体-抗GST标签抗体
随着越来越多的新基因的发现,基因融合蛋白表达体系以其在新发现蛋白研究中的显著优势已得到广泛应用。其中GST标签体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点。
3、HA抗体-抗HA标签抗体
融合标签,如HA、His等标签的使用可以简化蛋白质的纯化过程、控制蛋白质固定的空间取向及方便检测、使体内生物事件可视化、提高重组蛋白质的产量、增强重组蛋白质的可溶性和稳定性等。常用的标签包括myc、HA、Flag、His、GST等。
参考资料来源:百度百科-标签抗体
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